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熙寧小課-第64期 | 單抗激動劑藥物應該如何做臨床PD檢測——以O(shè)X40單抗為例
發(fā)布作者:熙寧生物發(fā)布時間:2022-02-25

免疫檢查點抑制劑成功用于腫瘤疾病的治療,刺激了廣泛的針對免疫調(diào)節(jié)靶點的研究熱情,包括針對T細胞共刺激受體的激動劑,例如OX40,4-1BB,GITR , ICOS等靶點。與免疫檢查點抑制劑,需要對靶點完全和持續(xù)的受體占位率才能最大程度的發(fā)揮藥效不同,對于免疫檢查點激動劑類藥物,什么才是最佳給藥方案?多少的受體占有率才能發(fā)揮最大藥效?這些都有待于更多的研究。



眾所周知,對于免疫檢查點抑制劑,PD-1,PD-L1,TIGIT等靶點,受體占位率的研究是臨床PD研究的標準配置之一。更多關(guān)于受體占有率檢測的背景信息,請參考熙寧/精翰微信公眾號平臺,熙寧小課系列:基于流式細胞術(shù)的大分子藥物受體占位研究。

為了解決臨床研究過程中,臨床中心分離PBMC耗時耗力,需要配置相關(guān)設(shè)備和人員的矛盾;為了解決隨采集隨運輸?shù)母哌\費,隨到隨檢的高檢測費用,精翰生物經(jīng)過不懈的努力,開發(fā)并驗證了基于凍存外周血全血的實驗方案,并在包括PD-1,PD-L1,TIGIT,CD19, CD20, CD73 等一系列靶點上進行了驗證,成功用于臨床樣品的分析,極大的方便了臨床樣品采集和并減少了樣品分析的費用。更多的信息,請請參考熙寧/精翰微信公眾號平臺,熙寧小課系列:大分子受體占位檢測,使用凍存全血,您想嘗試一下嗎?

對于免疫檢查點激動劑,遠比抑制劑要復雜的多,本文以O(shè)X40靶點為例,分享BMS-986178臨床前和臨床的一系列研究,與諸位同行探討單抗類激動劑藥物,應該如何進行哪些轉(zhuǎn)化醫(yī)學的研究,助力藥物的開發(fā)。


根據(jù)激動劑類藥物的作用過程和機制,可以作為PD指標的檢測主要包括:


一、受體激動劑類的單抗與靶點結(jié)合(受體占位率的檢測);抗體與靶點結(jié)合后,可能引起靶點表達水平的調(diào)節(jié)(靶點在細胞表面的表達水平);


如圖1的 A所示,測試了OX40在第8天和第13天,單獨給藥以及與PD-1聯(lián)合給藥,三個不同的劑量下(0.03,0.3,3 mg/kg)在外周血和腫瘤Treg亞群上的受體占有率,可以看到隨著給藥劑量的增加,受體占位率增加,第13天與第8天相比,受體占有率有不同程度的降低;如圖1 的B和C所示,與PD-1聯(lián)合給藥的兩個不同的劑量下(0.5,5 mg/kg),在第10天,第17天和第23天的OX40受體占有率和OX40的表達水平,可以看到5mg/kg組相比0.5mg/kg 組,受體占位率更高一些;且隨著給藥時間的延長,OX40的表達量增加。如圖2的A所示,在人體試驗中20,40,80,160,320mg在給藥后的C1D8和C2D1基本都能保持80%以上的受體占有率,但是與動物實驗不同的是,給藥后OX40的表達水平,在人體試驗中是降低的,而在動物實驗中是增加的。此外,如圖3所示,使用人CD4+T細胞進行了OX40 受體占位率,OX40受體表達水平,T細胞增殖的相關(guān)研究,研究表明,隨著受體占位率的增加,在受體占有率達到40%以上時,OX40的表達水平開始降低。

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圖1 抗鼠OX40抗體的動物實驗數(shù)據(jù)


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圖2 抗人OX40抗體的人體實驗數(shù)據(jù)


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圖3 抗人OX40抗體受體占有率和表達水平




二、抗體與靶點結(jié)合后,可以刺激T細胞的激活,進行細胞進行增殖(細胞亞群的檢測,T細胞表面的激活指標,如CD69,HLA-DR,4-1BB, ICOS等指標,以及反映細胞增殖的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子Ki67或者直接測定血液中細胞亞型以及細胞因子,比如IFN-γ的濃度)。



如圖4,所示,OX40抗體單獨給藥,OX40與PD-1抗體聯(lián)合給藥或者OX40與CTLA-4聯(lián)合給藥情況下,Ki67陽性細胞亞群占CD4T和CD8T細胞亞群的比例,可以看到明顯的Ki67%占比隨著OX40給藥劑量的增加而增加。另外,從表1可以看出,Ki67%細胞在CD4+ effector memory細胞亞群和CD4+ effector-like亞群,IFN-γ,IP-10和CXCL10三個細胞因子,在OX40與PD-1抗體聯(lián)合給藥或者OX40與CTLA-4聯(lián)合給藥情況下,很多檢測點的結(jié)果與C1D1相比,都顯示出非常明顯的差異。


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圖4 OX40抗體在CT26動物模型中的結(jié)果


表1 外周血細胞亞群分析和外周血細胞因子分析

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經(jīng)過以上的分析,我們可以知道對于OX40這個靶點,藥物濃度越高,受體占位率越高,但是OX40的受體表達量,細胞因子分泌,T細胞增殖缺并非藥物濃度越高越好,因此什么樣的給藥劑量,什么樣的給藥間隔是最合適的,還需要更多的研究,尤其是臨床研究的相關(guān)結(jié)果。


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圖5  BMS-986178藥物劑量與OX40受體占位率,OX40受體表達

的藥代動力學-藥效學的轉(zhuǎn)化模型



單抗激動劑藥物雖然已經(jīng)經(jīng)過了30多年的發(fā)展,但是至今沒有一個在售的藥物,單抗激動劑藥物相比免疫抑制劑類的藥物,無疑需要克服更多的挑戰(zhàn),因此在單抗激動劑藥物的臨床和臨床前研究中,需要更多的生物分析工作的支持。熙寧生物在支持激動劑類藥物的臨床分析中,已經(jīng)積累的大量經(jīng)驗,已經(jīng)完成和正在進行的臨床研究有十余個。已經(jīng)積累了豐富的經(jīng)驗,主要包括:

1.基于流式細胞術(shù)的淋巴細胞亞群分析,具體包括T, B, NK, Mono等亞群的占比和絕對數(shù)量分析; Treg 亞群分析;T cell EM,CM等亞群分析;

2.基于流式細胞術(shù)的T細胞激活指標分析,包括4-1BB,CD69,HLA-DR,CD25等亞群占比分析;

3.基于流式細胞術(shù)的細胞增殖分析,包括Ki67+占比分析和EdU+細胞陽性率分析;

4.基于流式細胞術(shù)的受體占位率分析;

5.基于流式細胞術(shù)的受體表達量分析;

6.基于MSD,ELISA,Luminex和CBA的細胞因子分析;

7.基于ELISPOT的T細胞,B細胞激活分析。



參考文獻:


Wang, R., Gao, C., Raymond, M., Dito, G., Kabbabe, D., Shao, X., … Quigley, M. (2019). An Integrative Approach to Inform Optimal Administration of OX40 Agonist Antibodies in Patients with Advanced Solid Tumors. Clinical Cancer Research. doi:10.1158/1078-0432.ccr-19-0526 


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