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PART 01

從結(jié)構(gòu)上來(lái)說(shuō)，ADC是由單克隆抗體、連接子和小分子藥物構(gòu)成的多結(jié)構(gòu)域分子，通過(guò)ADC分子的抗體部位特異地結(jié)合到目標(biāo)細(xì)胞表面的靶抗原，介導(dǎo)內(nèi)化作用后進(jìn)入細(xì)胞，再通過(guò)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境和溶酶體的作用釋放出小分子藥物發(fā)揮作用。與單獨(dú)使用抗體或小分子藥物相比，ADC 兼具了小分子與抗體藥物的雙重優(yōu)勢(shì)。

理想的ADC藥物能在循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定存在并能準(zhǔn)確到達(dá)靶標(biāo)部位，最終在靶標(biāo)位置釋放載荷。從靶點(diǎn)上來(lái)說(shuō)，理想的靶點(diǎn)需要滿足兩個(gè)條件，一個(gè)是僅在靶標(biāo)細(xì)胞上表達(dá)或者主要在靶標(biāo)細(xì)胞上表達(dá)，第二個(gè)是在抗體結(jié)合后可以進(jìn)行內(nèi)化。傳統(tǒng)的靶點(diǎn)是在腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)的一些靶點(diǎn)，比如HER2、EGFR，目前也有一些較新的靶向腫瘤微環(huán)境的ADC靶點(diǎn)。從抗體上來(lái)說(shuō)，為了更好的將ADC導(dǎo)向靶標(biāo)細(xì)胞，抗體需要考慮其親和力、靶點(diǎn)結(jié)合后內(nèi)吞入細(xì)胞的能力、免疫原性以及半衰期等。目前抗體端除了使用人源化的單抗以外，減少分子量以增加穿透性的抗體片段、增加靶向效率的雙表位或者雙靶點(diǎn)的雙抗也出現(xiàn)在不少ADC中。連接子也是非常重要的部分，直接決定了ADC的穩(wěn)定性以及在腫瘤細(xì)胞中釋放毒素的效率，包括可裂解和不可裂解兩種類型，不可裂解的連接子在循環(huán)系統(tǒng)中更穩(wěn)定，脫靶毒性較低；可裂解的連接子在小分子藥物釋放后可以發(fā)揮旁觀者效應(yīng)，增加效果。小分子藥物主要是針對(duì)腫瘤適應(yīng)癥的毒素，例如微管蛋白抑制劑、DNA損傷劑，或者是一些針對(duì)自身免疫適應(yīng)癥的激素類調(diào)節(jié)分子，目前也有一些ADC藥物同時(shí)連接兩種不同的小分子藥物協(xié)同發(fā)揮藥效。

ADC藥物發(fā)展至今共經(jīng)歷了三代技術(shù)的變革，在穩(wěn)定性、DAR（小分子藥物和抗體的結(jié)合比）值均一性、CMC特性、抗腫瘤活性上都在不斷改善，治療窗口也在不斷擴(kuò)大。尤其是第三代的ADC，由于定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)的發(fā)展，在很大程度上改進(jìn)了DAR值均一性的問(wèn)題，改善了ADC藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特性。

PART 02

本質(zhì)上來(lái)說(shuō)，ADC藥物是一個(gè)不均一的混合物。不同的DAR值，同樣DAR值不同的偶聯(lián)位點(diǎn)，都可能產(chǎn)生不同的分子。在進(jìn)入體內(nèi)以后，一方面ADC分子可能會(huì)因?yàn)轶w內(nèi)的降解而產(chǎn)生相應(yīng)的變化，另一方面不同DAR值的ADC分子可能會(huì)有不同的清除率，所以隨著給藥時(shí)間的推移，不同采樣點(diǎn)上ADC的DAR值分布和開(kāi)始給藥的ADC藥物可能會(huì)有很大的不同，尤其是在比較靠后的時(shí)間點(diǎn)。

隨著ADC分子在體內(nèi)的代謝變化，最終會(huì)形成不同的檢測(cè)物形式，主要是不同DAR值的完整的ADC分子、沒(méi)有連接小分子藥物的裸抗、游離的小分子藥物及其代謝物。那在臨床生物分析檢測(cè)時(shí)，重點(diǎn)需要關(guān)注檢測(cè)哪些形式呢？可以先看一下已上市的ADC藥物的相關(guān)信息。

表1  已上市ADC藥物臨床PK檢測(cè)形式總結(jié)

從上表的總結(jié)可以看出，在目前全球上市的15款A(yù)DC藥物的臨床PK檢測(cè)上，絕大部分檢測(cè)的是總抗體（PK-TAb）、ADC（PK-ADC）和游離小分子藥物（PK-Payload）這三項(xiàng)。在檢測(cè)方法上，通常使用LBA方法檢測(cè)總抗體和ADC，少量上市藥物使用LC-MS進(jìn)行檢測(cè)，游離小分子藥物均使用LC-MS方法檢測(cè)。

PART 03

從ADC的代謝特征上來(lái)看，目前ADC藥物總體而言表現(xiàn)的是類似抗體的特征，比如較低的清除率、較長(zhǎng)的半衰期、低分布容積、非線性分布和消除等。

對(duì)于反映ADC藥物PK特征的總抗體和ADC的檢測(cè)，目前LBA是最常用的檢測(cè)方式，從方法設(shè)計(jì)上來(lái)說(shuō)，對(duì)于總抗體，可以使用一對(duì)試劑對(duì)來(lái)分別作為捕獲和檢測(cè)試劑，這里的試劑可以考慮使用特異性的抗ADC抗體端的抗體、靶點(diǎn)蛋白、通用型的抗IgG抗體。對(duì)于ADC的檢測(cè)，通常使用抗小分子藥物的抗體作為捕獲試劑，再使用抗ADC抗體端的抗體、靶點(diǎn)蛋白或者通用型的抗IgG抗體作為檢測(cè)試劑進(jìn)行試劑配對(duì)組合。

圖1  ADC藥物-TAb & ADC 方法設(shè)計(jì)

由于ADC藥物的PK需要檢測(cè)TAb和ADC兩種不同的形式，為了最大程度的保證兩種不同形式檢測(cè)結(jié)果的可比性，需要在方法開(kāi)發(fā)中重點(diǎn)考慮DAR值敏感性和靶點(diǎn)干擾對(duì)檢測(cè)的影響， 并在開(kāi)發(fā)中最大程度保證兩種方法的一致性。

ADC藥物在進(jìn)入體內(nèi)以后，會(huì)有一系列的代謝轉(zhuǎn)化。一方面ADC分子中的毒素可能會(huì)在循環(huán)系統(tǒng)脫落或部分脫落，另一方面不同DAR值的ADC分子可能會(huì)有不同的清除率，通常DAR值更大的分子清除率更快。所以從ADC分子的變化來(lái)說(shuō)，隨著時(shí)間的推移，分析物本身的DAR值分布總體而言會(huì)有降低的趨勢(shì)。在分析方法開(kāi)發(fā)時(shí)，使用不同DAR值標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)試，選擇DAR值不敏感的分析方法就是一個(gè)保證樣品結(jié)果可比性的關(guān)鍵點(diǎn)。

例如上表中的例子，在該例子中，ADC的平均DAR值是4，從不同配對(duì)試劑的結(jié)果來(lái)看，對(duì)于總抗體的測(cè)試數(shù)據(jù)，其試劑配對(duì)1在低DAR值標(biāo)準(zhǔn)品及裸抗檢測(cè)時(shí)，測(cè)定結(jié)果明顯偏低，試劑配對(duì)2受DAR值影響較??；對(duì)于ADC的方法而言，其試劑配對(duì)1受DAR值影響較小，但試劑配對(duì)2在檢測(cè)低DAR值標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)明顯結(jié)果偏低。在這個(gè)例子中，如果我們?cè)诳偪贵w和ADC的檢測(cè)上，都選擇其相應(yīng)的試劑配對(duì)1，在實(shí)際的樣品檢測(cè)中，很可能會(huì)出現(xiàn)ADC濃度大于總抗體的情況，因?yàn)榭偪贵w檢測(cè)結(jié)果在DAR值變低后是偏低的。另外，如果我們?cè)诳偪贵w和ADC的檢測(cè)上，都選擇其相應(yīng)的試劑配對(duì)2，結(jié)果很可能會(huì)出現(xiàn)ADC濃度明顯低于總抗體的情況，看上去像是ADC分子的毒素有很多全部脫落了，但其實(shí)和方法學(xué)也有不小的關(guān)系。

從上面的討論中，我們可以看出，ADC臨床檢測(cè)中出現(xiàn)的有些不合邏輯的問(wèn)題，是可以在方法學(xué)中找到原因的，我們也可以通過(guò)前期方法學(xué)更細(xì)致的設(shè)計(jì)和測(cè)試，選擇最優(yōu)的方法形式以免在樣品檢測(cè)中出現(xiàn)問(wèn)題。就如上面這個(gè)例子，最終正確的選擇顯然是用總抗體的試劑配對(duì)2進(jìn)行總抗體的檢測(cè)，ADC的試劑配對(duì)1進(jìn)行ADC的檢測(cè)，這樣才能保證方法學(xué)檢測(cè)不同DAR值A(chǔ)DC產(chǎn)物的一致性。

ADC藥物是靶向細(xì)胞上的靶點(diǎn)，靶點(diǎn)通常在循環(huán)系統(tǒng)中濃度并不是很高，因此靶點(diǎn)干擾的問(wèn)題經(jīng)常容易被忽視。但在實(shí)際的項(xiàng)目中，一方面部分靶點(diǎn)在循環(huán)系統(tǒng)中的濃度并不低，例如BCMA，濃度在幾百ng/mL；又例如HER2，在部分高表達(dá)患者中，循環(huán)系統(tǒng)中能到達(dá)μg/mL水平；另一方面，很多靶點(diǎn)在給藥后循環(huán)系統(tǒng)中的總濃度會(huì)增加，這些都會(huì)增加靶點(diǎn)對(duì)方法的影響，尤其是對(duì)一些樣品濃度低的采樣點(diǎn)，如果分析方法在總抗體和ADC方法的靶點(diǎn)耐受上差異很大，很可能也會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不一致。

總體而言，對(duì)于靶點(diǎn)干擾的問(wèn)題，需要我們?cè)诜椒ㄔO(shè)計(jì)時(shí)關(guān)注總抗體和ADC方法檢測(cè)的藥物形式是否有差別，也就是我們?cè)趩慰箼z測(cè)中的total和free的問(wèn)題。那另外就是在開(kāi)發(fā)階段，需要進(jìn)行靶點(diǎn)干擾的測(cè)試，選擇不受靶點(diǎn)預(yù)期濃度干擾的方法形式，或者選擇靶點(diǎn)對(duì)總抗體和ADC干擾程度近似的方法形式。

對(duì)于總抗體和ADC的檢測(cè)，在方法層面上盡可能保證一致性，也能更好的保證樣品在檢測(cè)上的一致性。例如，除包被試劑不同外，盡可能使用相同的緩沖液和檢測(cè)試劑；方法參數(shù)（定量范圍、MRD等）及操作盡可能一致。在定量范圍一致的情況下，推薦使用同一批標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品進(jìn)行總抗體和ADC的檢測(cè)，以減少配制帶來(lái)的差異。

PART 04

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