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PD-L1不同檢測抗體互用性比較
熙寧小課-第122期 | PD-L1免疫組化檢測抗體怎么選？(上) 主要介紹了PD-L1免疫組化檢測5種常見抗體的應(yīng)用，我們會發(fā)現(xiàn)同一適應(yīng)癥不同藥物對應(yīng)的PD-L1檢測試劑盒不同，與療效相關(guān)的PD?L1陽性判讀閾值亦不相同，那么不同抗體間檢測的結(jié)果是否可以互用，陽性判讀閾值是否可以互用？
針對這個問題，目前已有較多的研究，比較有影響力的是國際肺癌研究協(xié)會（International Association for the Study of Lung Cancer, IASLC）牽頭發(fā)起的藍(lán)印計劃，藍(lán)印計劃1期研究中使用四種PD-L1 抗體（22C3、28-8、SP142和SP263）對總共38例NSCLC腫瘤標(biāo)本進(jìn)行了染色，三位病理醫(yī)生獨立評估了染色結(jié)果，判讀閾值采用所有抗體對應(yīng)cut-off值，28-8和22C3抗體為TC≥1%染色，SP 263抗體為TC≥25%染色，SP142抗體為TC≥1%染色或PD-L1陽性IC（TC1/IC1）面積占比≥1%。
PART 01
不同抗體染色一致性研究
分析比較表明，當(dāng)使用22C3、28-8和SP263抗體時，PD-L1染色的腫瘤細(xì)胞的百分比一致率較高，而SP142抗體總體上顯示出腫瘤細(xì)胞膜染色較弱、陽性腫瘤細(xì)胞較少、敏感性較低的結(jié)果，與另外三種抗體相比存在偏離。不同抗體免疫細(xì)胞染色結(jié)果差異性高于腫瘤細(xì)胞染色結(jié)果（圖1）。
圖1每種抗體測定的腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞染色百分比的分析比較[6]
PART 02
基于不同抗體cut-off值患者分類一致性研究
通過比較不同抗體檢測結(jié)果陽性患者分類，來評估臨床診斷的一致性。在38例樣本中，50%（19/38）的樣本在四種抗體的檢測中均顯示高于其cut-off值，13.1%（5/38）的樣本在四種抗體的檢測中均顯示低于其cut-off值，而36.9%（14/38）的樣本在四種抗體的檢測中顯示出不一致的分類結(jié)果（圖2）。其中SP263抗體檢測結(jié)果顯示高于閾值的樣本較少，因為與28-8和22C3的1%閾值相比，25%的TC染色閾值更高。SP142檢測染色的腫瘤細(xì)胞較少，因此腫瘤細(xì)胞評分高于閾值的樣本較少，但由于額外評估免疫細(xì)胞染色，又有6例樣本高于閾值，陽性率得到了補(bǔ)償（圖2）。
圖2 高于或低于臨床分析閾值的病例比較[6]
注：展示了用四種PD-L1 抗體檢測結(jié)果分類的一致率，淺灰色表示低于閾值，深灰色表示高于閾值。
PART 03
不同抗體cut-off值互用性研究
另外也對不同抗體所采用的cut-off值進(jìn)行了互用性研究，22C3 采用28-8 或SP263對應(yīng)的 cut-off值，28-8采用22C3或SP263對應(yīng)的cut-off值，及SP263采用22C3或28-8對應(yīng)的 cut-off值進(jìn)行判讀，結(jié)果表明，不同組合下所判讀結(jié)果與自身抗體cut-off判讀結(jié)果的一致率為86.8％~94.7％；SP142采用22C3、28-8和SP263的cut-off判讀，一致率僅為63.2％~65.8％；22C3、28-8 和SP263采用SP142判讀標(biāo)準(zhǔn)，一致率僅為81.6％~86.8％。盡管研究中22C3、28-8和SP263染色相似，但22C3采用28-8或SP263對應(yīng)的cut-off值，28-8采用22C3或SP263對應(yīng)的cut-off值，以及SP263采用22C3或 28-8對應(yīng)的cut-off值判讀仍存在5.3％～13.2％的不同，所以采用不同的判讀結(jié)果可能直接影響治療方案的選擇（表1）。
表1 分析比較：當(dāng)染色抗體與臨床cut-off值“不匹配”時，
患者分類的總體一致率[6]
PART 04
小結(jié)
隨后的藍(lán)印計劃2期研究加入了大家熟悉的73-10檢測抗體，與22C3和28-8一樣，73-10抗體為阿維魯單抗的診斷試劑。藍(lán)印計劃2期研究也擴(kuò)大了樣本量、樣本類型及病理醫(yī)生的團(tuán)隊，以便更好的評估真實世界臨床樣本結(jié)果，該研究在81例肺癌樣本中使用22C3、28-8、SP142、SP263及73-10抗體進(jìn)行檢測， 2期研究確認(rèn)了1期的研究結(jié)論：28-8、22C3和SP263三種抗體檢測腫瘤細(xì)胞具有一致性，SP142 檢出陽性細(xì)胞較少，敏感性低，新加入的73-10抗體相比于其他抗體可檢出更多的陽性細(xì)胞，表現(xiàn)出更高的靈敏度（圖3）。
多項研究表明，E1L3N與22C3、28-8、SP263抗體有著良好的一致性 [8-13]，雖然各項研究結(jié)果表明，E1L3N、22C3、28-8和SP263一致性較高，但目前的指南仍然認(rèn)為，尚缺乏足夠的前瞻性臨床研究證據(jù)支持抗體間檢測結(jié)果互用的可行性，仍建議根據(jù)不同的抗PD-1或PD-L1藥物選擇其對應(yīng)的PD-L1檢測抗體克隆及相應(yīng)的檢測平臺。
圖3 PD-L1在5種抗體中的染色結(jié)果比較[7]
熙寧生物|精翰生物PD-L1檢測服務(wù)
基于PD-L1抗體間檢測結(jié)果互用可行性研究，熙寧生物|精翰生物建立了PD-L1檢測的多種抗體平臺，包括22C3、28-8、SP263、E1L3N四種主流的靈敏度、特異性、一致性表現(xiàn)優(yōu)異的抗體。熙寧生物|精翰生物緊跟最新藥物研發(fā)需求，致力于為申辦方提供全面的PD-L1表達(dá)檢測平臺。熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室擁有BenchMark Ultra，Dako Autostainer Link 48，Leica Bond III等PD-L1不同抗體適配的全自動免疫組化染色平臺，已建立了PD-L1檢測標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，成功完成22C3、28-8、SP263、E1L3N 4種抗體檢測方法學(xué)開發(fā)及性能驗證，可支持申辦方根據(jù)對標(biāo)藥物對應(yīng)的診斷抗體按需選擇。
4種抗體22C3、28-8、SP263、E1L3N部分檢測數(shù)據(jù)展示：
熙寧生物|精翰生物免疫組化平臺多次高分通過國內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)舉辦的室間質(zhì)評，全流程標(biāo)準(zhǔn)化操作與質(zhì)量控制也獲得權(quán)威機(jī)構(gòu)的充分認(rèn)可，能夠為客戶提供精準(zhǔn)優(yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)和嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的質(zhì)量保證。
PD-1/PD-L1免疫治療患者入排檢測服務(wù)
免疫治療中針對EGFR及ALK陰性非小細(xì)胞肺癌患者入排檢測，熙寧生物|精翰生物NGS和PCR平臺有多款產(chǎn)品可以支持，針對HER2陰性胃癌和三陰性乳腺癌患者入排檢測，熙寧生物|精翰生物的IHC、FISH和CISH平臺也可以很好地滿足該檢測需求，具體的樣本檢測周期亦可結(jié)合申辦方需求進(jìn)行合理調(diào)整。
熙寧生物 | 精翰生物病理檢測及CDx開發(fā)
熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室擁有BenchMark Ultra，Dako Autostainer Link 48，Leica Bond III等國際公認(rèn)的全自動免疫組化染色平臺，遵從CAP和GCP體系要求，按照“合規(guī)、精準(zhǔn)、伴隨診斷”的理念，成功完成包括PD-L1、Claudin18.2、HER2、HER3、TROP-2、dMMR、TIM-3、MSLN、B7H3等超200種靶標(biāo)的免疫組化方法開發(fā)，且多種方法已獲得NordiQC、CAP、CCPI等國內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。
除上述提到的免疫組化檢測，熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室還可支持H&E染色，免疫組化（單染，雙染），mIHC，F(xiàn)ISH，特殊染色等技術(shù)服務(wù)，滿足臨床試驗檢測需求。
對于客戶的伴隨診斷需求，我們已篩選出了多株具有伴隨診斷開發(fā)價值的單克隆抗體并完成了前期的試劑盒開發(fā)，可為廣大藥企客戶提供伴隨診斷試劑盒開發(fā)服務(wù)，歡迎致電咨詢。
部分IHC結(jié)果展示
參考文獻(xiàn)
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